Méthodes et biomarqueurs diagnostiques

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Épreuve de génotypage et méthode pour diagnostiquer la myopathie liée aux statines

Résumé

Invention comprenant des méthodes et des compositions en vue du diagnostic des myopathies liées aux statines fondé sur le génotype. Cette invention comprend des batteries de biomarqueurs et de génotypage, des algorithmes et des méthodes pour diagnostiquer les myopathies liées aux statines et réaliser des évaluations personnalisées. Elle comprend des compositions et des méthodes fondées sur le polymorphisme génétique associé aux variations du taux plasmatique normal de créatine kinase (CK) en l’absence d’un état pathologique et au taux de CK plasmatique en présence d’un état pathologique. Les variants génétiques fournis avec cette invention sont également utiles en tant que cibles dans le cadre de la conception de réactifs à vocation diagnostique et pronostique, du développement d’agents thérapeutiques et prophylactiques en vue du pronostic, du traitement et/ou de la prévention des myopathies liées aux statines et d’autres troubles musculaires, de l’évaluation de la réponse des patients aux statines et des effets indésirables de l’emploi des statines, et de la prise de décisions cliniques éclairées, notamment le choix de solutions de rechange aux statines.

Titre, banque de brevets Derwent : pas encore disponible
Statut : Technologie en cours de développement. Demande de brevet provisoire déposée aux États-Unis.
Date de priorité : 28 septembre 2012
Inventeurs : Dre Marie-Pierre Dubé, Dr Jean-Claude Tardif

Contexte

La maladie cardiovasculaire est la principale cause de mortalité et d’hospitalisation. Son traitement entraîne des coûts directs et indirects d’environ 22,2 milliards de $ par an. Une importante fraction de ces coûts peut être imputée à l’achat de médicaments offrant peu de bienfaits thérapeutiques, voire aucun, à certains patients ou groupes de patients, en raison de leur manque d’efficacité, de l’inobservance ou de l’abandon rapide du traitement. Les statines sont un exemple de tels médicaments. L’inobservance du traitement par les statines est un problème de taille. Elle est souvent due au diagnostic erroné de la myopathie liée aux statines, qui entraîne l’abandon inutile de ces agents. Or, une plus grande exactitude diagnostique pourrait se traduire par de meilleurs résultats cliniques et un meilleur usage des ressources en santé. Les statines sont la pierre angulaire du traitement de l’hyperlipidémie et de la prévention primaire et secondaire des maladies cardiovasculaires, et constituent la classe d’agents les plus prescrits à ces fins. Cependant, jusqu’à 40 % des dépenses actuelles en statines, soit 18 milliards $ dans le monde en 2010, ne se traduisent par aucun bienfait clinique à cause de l’inobservance. Jusqu’à 50 % des patients qui reçoivent une ordonnance de statines abandonnent ces agents au cours des 18 premiers mois de traitement et n’en retirent par conséquent aucun bienfait thérapeutique. On pense que l’inobservance est attribuable aux douleurs que patients et médecins prennent à tort pour la myopathie liée aux statines. En fait, les données cliniques indiquent que la myopathie liée aux statines touche de 7 à 10 % seulement des patients et qu’elle n’entraîne de complications menaçant la vie que chez 0,001 % d’entre eux. Il est donc probable que jusqu’à 40 % des patients qui abandonnent les statines le font pour de mauvaises raisons et que la poursuite du traitement leur aurait été bénéfique.

Par ailleurs, comme les statines ne permettent d’éviter certains événements vasculaires particuliers (comme la mort, l’infarctus du myocarde) que chez une minorité de patients, même la majorité des sujets fidèles au traitement sont exposés au risque. L’existence d’un test qui permet de diagnostiquer la myopathie liée aux statines de façon fiable et exacte permettrait d’assurer un plus fort pourcentage d’observance, de réduire le gaspillage de fonds et d’accroître les bienfaits cliniques généraux.

Facteurs génétiques permettant de prévoir les fluctuations du RIN, en vue d’améliorer le traitement par la warfarine

Résumé

Invention ayant trait aux méthodes et aux trousses de dépistage d’une prédisposition aux fluctuations anormales du ratio international normalisé (RIN) chez des patients qui reçoivent de la warfarine. Selon un de ses modes de
réalisation, la méthode comporte la recherche d’un variant génétique prédéfini. La présence de ce variant génétique est corrélée avec les fluctuations anormales du RIN durant l’emploi de la warfarine. La reconnaissance des sujets prédisposés aux fluctuations anormales du RIN durant l’emploi de la warfarine repose sur la mise en évidence du variant grâce au test de dépistage. Selon un autre mode de réalisation, l’invention est une trousse de dépistage du variant génétique prédéfini. La présence de ce variant génétique est corrélée avec les fluctuations anormales du RIN durant l’emploi de la warfarine. La trousse comprend un indicateur qui permet de dépister le variant génétique et de cerner les sujets prédisposés aux fluctuations anormales du RIN durant l’emploi de la warfarine.

Titre, banque de brevets Derwent : Identifying a subject having genetic predictors of predisposition to abnormal international normalized ratio fluctuation during warfarin therapy comprises testing the subject to check for a presence of a predetermined genetic variation
(Reconnaissance des porteurs de facteurs génétiques prévisionnels d’une prédisposition aux fluctuations anomales du ratio international normalisé durant le traitement par la warfarine, par la recherche d’un variant génétique prédéfini).
Statut : Demandes en cours d’examen au Canada (CA 2,706,021) et aux États-Unis (US20100304393).
Date de priorité : 28 mai 2009
Inventeur : Dre Marie-Pierre Dubé

Contexte

La warfarine est l’anticoagulant oral le plus prescrit pour le traitement et la prévention de la maladie thromboembolique. La très grande variabilité du schéma posologique entre patients cause un problème qui s’aggrave à mesure que la population vieillit et que le nombre de patients admissibles au traitement augmente. La surveillance systématique de l’efficacité et de l’innocuité du traitement par la warfarine repose sur la mesure du ratio international normalisé (RIN), qui est le rapport entre le temps de coagulation observé et une valeur de référence. Plus précisément, le RIN constitue un système de déclaration des résultats des tests de coagulation sanguine. Ainsi, chez une personne recevant  de la warfarine, le temps de Quick (prothrombine) optimal exprimé en RIN devrait se situer entre 2 et 3. Malgré le grand nombre de cliniques d’anticoagulothérapie et de bons programmes de surveillance du RIN, jusqu’à 15 % des utilisateurs de warfarine ont des saignements et 11 % des patients ont des accidents thromboemboliques qui peuvent mener à l’hospitalisation et au décès. Le risque hémorragique est notamment plus élevé quand les fluctuations portent le RIN au-dessus de la plage thérapeutique cible.

D’après le rapport d’une étude, à chaque augmentation d’un point du RIN correspond une hausse de la probabilité d’hémorragie de 0,6 chez le patient plus jeune et de 0,4 chez le sujet âgé. Au cours d’une étude en milieu hospitalier, les RIN d’au moins 4 ont entraîné une hausse marquée du risque hémorragique (risque relatif approché de 13; IC à 95 % de 1,2 à 150). Or, le RIN fluctue pour se situer au-dessus de la plage thérapeutique cible jusqu’à 30 % du temps au cours des 3 premiers mois de traitement et jusqu’à 14 % du temps par la suite. La contribution relative de divers génotypes à la détermination du schéma posologique a été étudiée dans diverses populations de patients, et des comparaisons axées sur l’ethnicité des patients ont été menées. La plupart des études antérieures se sont appuyées sur le polymorphisme génétique pour prévoir une dose thérapeutique d’entretien, sur l’incidence de l’algorithme sur le pourcentage de patients dont le RIN se trouve à l’extérieur de la plage thérapeutique ou sur le temps écoulé avant la stabilisation du RIN et de la dose de warfarine. Cependant, bon nombre des effets indésirables de la warfarine surviennent après l’atteinte de la dose d’entretien, et il est probable que la réponse au traitement fluctue davantage chez certains patients. Sur le plan clinique, il est donc judicieux de se demander comment exploiter l’information génétique pour reconnaître les sujets dont la réponse au traitement risque fort de fluctuer après l’atteinte de la dose d’entretien. Un test de dépistage génétique qui fournirait ce renseignement pourrait servir à éclairer les décisions cliniques de manière à réduire la fréquence des effets indésirables durant le traitement par la warfarine.

Références connexes : Marin-Leblanc M, Perreault S, Bahroun I, et al. Validation of warfarin pharmacogenetic algorithms in clinical practice. Pharmacogenomics. 2011;13(1):21–9. 

Adresse : http://www.futuremedicine.com/doi/abs/10.2217/pgs.11.120?url_ver=Z39.88-...

La protéine 2 analogue de l’angiopoïétine (ANGPTL2), biomarqueur des anomalies fonctionnelles et de la sénescence des cellules de l’endothélium vasculaire

Résumé

Méthode d’évaluation de l’état physiologique (normal) de mammifères. Méthode comportant les étapes suivantes : obtention d’un échantillon biologique de mammifère; mesure de l’expression d’ANGPTL2 dans l’échantillon biologique; et évaluation de l’état physiologique du mammifère, par comparaison de l’expression mesurée et d’une valeur normale prédéfinie, établie chez des sujets sains, un taux d’ANGPTL2 supérieur à la normale prédéfinie témoignant d’un état pathologique.

Titre, banque de brevets Derwent : Assessing physiological state of a mammal comprises measuring angiopoietin-like 2 expression in the biological sample (Évaluation de l’état physiologique d’un mammifère par mesure de l’expression d’ANGPTL2 dans un échantillon biologique).
État : Brevet obtenu aux États-Unis (US 7,972,795), brevet en instance au Canada (CA 2,592,372) Première allégation (US 7,972,795: 1). Méthode d’évaluation de l’état physiologique (normal) de mammifères, comportant l’obtention d’un échantillon biologique de  mammifère; la mesure de l’expression d’ANGPTL2 dans l’échantillon biologique; et l’évaluation de l’état physiologique du mammifère par comparaison de l’expression mesurée et d’une valeur normale prédéfinie, établie chez des sujets sains; un taux d’ANGPTL2 supérieur à la normale prédéfinie témoigne d’un état pathologique.
Date de priorité : 20 juin 2006
Inventeurs : Dr Éric Thorin; Nada Farhat; Nathalie Trescases

Contexte

Fréquentes durant le processus de vieillissement, les lésions athéroscléreuses peuvent mener à la maladie coronarienne et favoriser l’ischémie cardiaque et la mort. Il existe un lien entre les maladies cardiovasculaires et de nombreux facteurs de risque tels que le vieillissement, le diabète, l’obésité, l’hypertension, la dyslipidémie ainsi  que les infections virales et bactériennes. Ces facteurs de risque sont liés à une intensification du stress oxydatif dans l’endothélium vasculaire qui favorise l’athérogenèse. Or, la fonction endothéliale se dérègle avant l’apparition des signes cliniques de maladie vasculaire. Un biomarqueur qui permettrait de dépister l’atteinte endothéliale et de se prononcer sur l’étendue des lésions pourrait étayer une intervention rapide et contribuer à éviter l’installation et les répercussions des maladies coronariennes.

Références connexes

Farhat N, Thorin-Trescases N, Mamarbachi M, et al. Angiopoietin-like 2 promotes atherogenesis in mice.
Journal of the American Heart Association. 2012;2(3):e000201. Pubmed: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23666461

Farhat N, Thorin-Trescases N, Voghel G, et al. Stress-induced senescence predominates in endothelial cells isolated from atherosclerotic chronic smokers. 
Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 2008;86(11):761–9. Pubmed: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19011671

Méthode pour détecter un biomarqueur du stress oxydatif dans un échantillon biologique

Résumé

La présente invention concerne des méthodes de détection d'un stress oxydatif dans un échantillon biologique, les méthodes de détermination d'un dossier cumulatif de dommages oxydatifs et les méthodes de diagnostic des maladies du vieillissement telles que les maladies cardiovasculaires, en fonction de la présence ou de l'absence d'un biomarqueur ou un de ses composants. La présente invention concerne également un kit pour détecter le stress oxydatif dans un échantillon biologique comprenant un réactif stabilisant et un anticorps. Dans certains modes de réalisation de l'invention, le biomarqueur de stress oxydatif est choisi parmi un produit d'addition de la protéine-aldéhyde et d'un aldéhyde produit d'addition de protéine métabolite. Le procédé de l'invention comprend en outre la mesure séparément pour les mêmes marqueurs biologiques de la protéine de stress oxydatif formés avec des acides aminés différents de la protéine.

Titre : Détection stress oxydatif utilisant échantillon biologique, implique l'obtention d'échantillon comprenant biomarqueur du stress oxydatif, stabiliser chimiquement biomarqueur dans l'échantillon, et l'extraction et la mesure de la quantité du composant mesurable
Statut : US brevets délivrés (US 7,993,859, US 8,030,010), demande canadienne en attente (CA 2672322)
Date de priorité : 14 Octobre, 2005 Première revendication US 7,993,859: Procédé de détection d'un stress oxydatif en utilisant un échantillon biologique, comprenant: (a) l'obtention de l'échantillon biologique, comprenant un biomarqueur du stress oxydatif ayant une composante mesurable, (b) stabiliser chimiquement le biomarqueur dans l'échantillon, (c) isoler la composante mesurable, (d) extraire la composante mesurable, et (e) la mesure de la quantité de la composante mesurable. Première demande US 8,030,010: 1. Procédé de détection d'un stress oxydatif en utilisant un échantillon biologique, comprenant: (a) l'obtention de l'échantillon biologique, comprenant un biomarqueur du stress oxydatif ayant une composante mesurable, ledit échantillon biologique étant choisi parmi le sang entier, les dérivés du sang, et leurs combinaisons, (b) stabiliser chimiquement le biomarqueur dans l'échantillon, (c) isoler la composante mesurable, (d) extraire la composante mesurable, et (e) la mesure de la quantité de la composante mesurable.
Inventeurs : Christine Des Rosiers, Jean-François Lesgards, Dr Jean-Claude Tardif (US7, 993,859): Christine Des Rosiers, Caroline Asselin, Bertrand Bouchard, Jean-Claude Tardif, Blandine Comte (US8, 030010)

Contexte

Au cours des 30 dernières années, de nombreuses preuves expérimentales accumulées soutiennent le rôle du stress oxydatif dans la pathogénie du vieillissement et les maladies cardiovasculaires (MCV). Certes, les essais cliniques randomisés avec "antioxydants naturels" ont été décevants (HOPE, HPS, GISSI-prévention) et ont conduit certains à s'interroger sur la pertinence de l'hypothèse du stress oxydatif [4-6]. Cependant, la majorité de ces études n'a pas évalué l'impact de l'intervention des antioxydants sur l'état de stress oxydatif, ou a utilisé la méthode très critiquée thiobarbituric d'acide des substances réactive (TBARS). Cela peut s'expliquer en partie par les difficultés rencontrées dans la validation de méthodes d'évaluation des biomarqueurs du stress oxydatif dans les liquides accessibles pour les études sur l'homme, qui nécessitent souvent des technologies de spectrométrie de masse coûteux et complexes. Récemment, isoprostane ont émergé comme relativement bons marqueurs de l'oxydation lipoperoxydation induite par le stress in vivo. Mais la mesure d'un biomarqueur unique est peu susceptible de fournir une information fiable sur les différents événements liés au stress oxydatif qui peut contribuer à la progression de maladies cardiovasculaires. Une molécule liée au stress oxydatif qui a suscité un intérêt considérable de recherche au cours des 10 dernières années est le 4-hydroxy-2 ,3-nonénal (HNE). HNE est un aldéhyde produit final généré par peroxydation de la classe la plus abondante de n-6 acides gras polyinsaturés. Semblable à radicaux libres, les aldéhydes sont des électrophiles qui réagissent facilement aux résidus nucléophiles des protéines, des acides nucléiques et des lipides, mais leur demi-vie relativement longue en font des candidats à la propagation des dommages aux cellules voisines. Parmi les aldéhydes, le 4-hydroxy-2-alcénals comme HNE sont considérés comme des espèces les plus réactives en raison de leur α β double liaison. HNE module les voies de signalisation impliquées dans la prolifération cellulaire, l'apoptose et l'inflammation, caractéristiques de la maladie cardiovasculaire. Adduits protéine-HNE sont connus pour former du plasma, tel que l'albumine et HNE-HNE-LDL. Dans détection quantitative passé de ces adduits a empêché le développement de biomarqueurs robustes basés sur HNE. HNE est lié principalement, dans ces adduits, soit par des liaisons aldéhyde azote par l'azote contenant des acides aminés ou aldéhyde soufre obligataires via soufre contenant des acides aminés, à savoir la cystéine. Les concentrations plasmatiques de ces adduits, déterminées par immunologique et spectrométrie de masse gaz (SMGC) les méthodes, l'augmentation dans des conditions de stress oxydatif dans les tissus myocardiques. Toutefois, les adduits contenant aldhyde-soufre sont des mesures instables et quantitatives nécessaires stabilisation chimique. La présente invention fournit une méthode fiable et quantitative pour la surveillance oxydatif peroxydation lipidique induite par le stress. La méthode a de nombreuses applications de surveillance ou de détection de pathologies où le stress oxydatif est indications, y compris les maladies cardiovasculaires et neurodégénératives.

Références connexes

Lesgards J-F, Frayne I, Comte B, et al. répartition différentielle des adduits 4-hydroxynonénal de soufre et les résidus d'azote dans les protéines du sang comme l'a révélé l'utilisation du nickel Raney et spectrométrie de masse gaz. [Pubmed]. Gratuit biologie et médecine radicale. 2009; 47 (10) :1375-85 disponible à partir de: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0891-5849 (09) 00471-7.

Asselin C, Shi Y, Clément R, J Tardif, C. Des Rosiers supérieur circulant 4 protéines hydroxynonénal-adduits thioéther en corrélation avec de graves dysfonctionnement diastolique plus chez les rats spontanément hypertendus. [Pubmed]. Rapport Redox: communications dans la recherche des radicaux libres. 2006; 12 (1) :68-72 disponible à partir de:.

Véronneau M, Comte B, C. Des Rosiers quantitative gaz dosage par spectrométrie de masse chromatographique de 4 hydroxynonénal lié aux protéines thiols dans les cœurs ischémiques / reperfusé rat. [Internet]. Gratuit biologie et médecine radicale. 2002; 33 (10) :1380-8 Disponible à partir de: http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S089158490201.